脐血CIK治疗红斑狼疮
脐血CIK细胞治疗严重性系统性红斑狼疮二例
祁岩超
广州医学院附属肿瘤医院 广州市 510095
【摘要】:目的:探讨严重型红斑狼疮的新的治疗方法.方法:从健康产妇足月分娩的脐带血中提取单个核细胞制备CIK细胞.再用CIK细胞输注治疗病人.结果: 用现有方法治疗无效二位严重型红斑狼疮患者的症状完全恢复,实验室指标明显好转,分别进入了正常的生活和学习.结论:CIK细胞过继免疫疗法可望成为治疗严重型红斑狼疮的新的辅助疗法.
【关键词】脐带血; CIK; 治疗; 红斑狼疮;
Two cases with severe SLE treated by CIK cells from cord blood
Qi Yanchao
Guangzhou Medical College Affiliated Tumor Hospital, Guangzhou 510095
Abstract: Objective: To investigate a new therapy for patients with severe lupus erythematosus. Methods: Cytokine-induced killer cells (CIK) were prepared from mononuclear cells isolated from the cord blood of healthy puerperants and were then infused to the patients. Results: Two patients with severe sestem lupus erythematosus treated with the existing therapeutic methods showed no effective response, but their symptoms fully recovered by CIK cells infusion and the laboratory indicators were obviously improved. Both of them had a normal life and learning resperctively. Conclusions: Adoptive CIK cells immunotherapy was expected to become a new adjuvant therapy for the patients with severe lupus erythematosus.
【Key Words】Cord Blood; CIK; Treat; SLE
系统性红斑狼疮(System Lupus Erythemotosus,SLE)是一种异质性疾病,是机体免疫系统功能失调后,对自身抗原产生免疫应答,造成自身组织器官病理损伤和功能障碍的一组疾病(10.目前对SLE的治疗主要是采用非异免疫抑制,如激素,环磷酰胺(CTX)等.虽在一定程度上可减轻症状,但终不能彻底解决问题(2).临床上对于那些“难治性SLE”更觉非常棘手.我们采用脐血CIK(Cytokine Induced Kill Cell)细胞治疗两例严重的难治性SLE,取得显著疗效,现报告如下:
1.材料和方法
1.1.主要仪器和材料
CO2恒温培养箱，日本Hikama公司出品；倒置显微镜，日本Olympus公司出品；Wellscan MK3型酶标仪，芬兰Labsystems公司出品；超净工作台等均为国产。K562细胞株，本室培养；基因工程IL-2，北京中化合通公司；CD3单克隆抗体（CD3Ab）加拿大YES生物技术公司，RPMI-1640培养基Gibco公司；Ficoll-hypaque D=1.077上海试剂二厂；人AB血清，广州中心血站提供。
1.2.脐血CIK细胞制备和输注
脐血采集 脐血取自正常足月妊娠健康产妇，于胎儿娩出断脐消毒后，选择较粗脐静脉穿刺，封闭式采取血液入无菌肝素抗凝血袋中。
CIK细胞制备 用Ficoll-Hypague淋巴细胞分离液（2000转/分，20min），分离出脐血单个核细胞，再用RPMI-1640培养液离心洗涤2次，用含有5%人AB血清的RPMI-1640培养液调至细胞浓度为5×106/ml，培养液含IL-2 1000U/ml和CD3Ab 5μg/ml, INF-γ1000μ/ml, IL-1 100μ/ml。370C，5%CO2条件下培养，分别于第7-14天收集(3).
CIK细胞输注 每位患者每次静脉输注CIK细胞1.6∽6.5×108,每天或隔天一次,6∽10次一疗程，每位患者输入CIK细胞总数2×109∽4.6×109
2.结果
例1. 关XX， 女、现年48岁，患严重红斑狼疮，狼疮脑、肾炎10年，伴下肢水肿，皮肤逐渐变黑，溃疡，有异味，坏疽及剧痛2年余，加重3个月。多方治疗效果不佳，且病情逐渐加重。已经无治疗希望。权威医院拒绝受治,经治疗医生动员截肢保命,病情已到绝路。在极度的痛苦和绝望中,要求试用生物治疗。自从2004年6月3日用生物疗法后，病情神奇好转,双下肢水肿全部消 ，11处坏疽，溃疡的疮面基本愈合，黑色痂皮已经脱落，呈现出了新鲜健康的皮肤组织。现在患者已能自由活动,进入正常生活。
例2.蔡XX,男, 现年18岁, 患系统性红斑狼疮, 狼疮脑、狼疮肾炎伴双侧胸腔小量积液,全身浮肿, 咳嗽、咳痰、呕吐等5年. 经多方治疗, 效果不佳。而且贫血严重, 靠每周输血一次维持生命, 有的经治医生亦失去信心, 建议家属放弃治疗。绝望之中, 抱着一线希望,试用生物治疗. 2005年10月8日开始加用生物治疗。 一疗程后, 病情明显好转, 咳嗽、咳痰、呕吐症状明显好转。浮肿消失, 双侧胸腔积液消失.二个疗程后实验室检查, 除蛋白尿生物治疗前后无明显改变外, 其它指标基本恢复正常, 现已恢复了休学三年的正常学习。
蔡XX生物治疗前后实验室检查结果
|
生物治疗前 |
生物治疗后 |
参考值 |
血红蛋白 |
75(050926) |
115(060217) |
120-160 g/L |
血清尿素氮 |
24.5(050920) |
4.9(060217) |
1.8-7.1mmol/L |
血清IgA |
1.03(050930) |
1.10(060217) |
0.69-3.82 |
血清IgG |
5.160 |
6.200 |
8-16 |
血清IgM |
0.441 |
0.646 |
0.62-2.77 |
补体3 |
0.716 |
1.250 |
0.85-1.93 |
补体4 |
0.249 |
0.276 |
0.12-0.36 |
尿蛋白 |
3.0(050920) |
3.0(060114) |
0g/L |
3.讨论
SLE是一种典型的自身免疫性疾病(Autoimmune Disease,AID), 目前临床上主要使用糖皮激素及其它广谱免疫抑制剂进行治疗。但其不良反应明显并且效果有限（4-5）。最近有人提出AID是造血干细胞异常导致的一组异常多克隆T、B淋巴细胞病，因此通过造血干细胞移植，破坏原来的异常免疫系统，恢复健康的免疫机制，有可能从根本上治愈AID，并且在临床上也取得了一定的效果。但是由于某些严重SLE因多伴有脏器损伤，不能耐受强烈的清髓治疗，又因移植物抗宿主反应（GVHD），和移植相关死亡率较高（10%）等。难于广泛推广（6）。当前以DNA特异性B细胞为靶标的干预治疗即“DNA疫苗”策略已成为治疗SLE的热点（7）。然而研究发现自身反应性B细胞在抗原提呈及共刺激分子表达方面的缺陷，因此，它能够逃避DNA疫苗诱导的CTL的“识别或杀伤”，同时DNA疫苗的安全性和应用于人体后免疫效果明显减弱等问题也尚未完全解决（8）。
CIK细胞是肿瘤细胞免疫治疗中常用的方法之一(9)。 CIK细胞是CD3和CD56双阳性细胞,又叫NK样T淋巴细胞.对肿瘤细胞的识别和杀伤能力较强,目前被广泛用于肿瘤患者的过继免疫治疗。我们运用脐血CD3AK细胞和脐血CIK细胞治疗肿瘤近10年,除了有5%患者有轻,中度的发热外,未见任何不良反应.实践证明使用安全(10).
我们用脐血CIK细胞治疗系统性红斑狼疮,国内外尚未见报道。脐血CIK细胞治疗SLE取得了显著疗效,可望为“难治性SLE”提供一个新的治疗方法。 脐血CIK细胞治疗SLE的机理,有待进一步研究。
参考文献
1.马丽，系统性红斑狼疮的个体化治疗（VCD），中华医药临床杂志（电子版），2008，2（6）：56
2.吴南海，系统性红斑狼疮的造血干细胞移植治疗. 临床儿科杂志.2008，26（4）：362-364
3.祁岩超，姜鸿南，王远东,等.脐血来源CIK细胞的体外扩增培养.世界肿瘤杂志，2006，5（1）：12-14
4.Tseng C. Bugon J, Belmont.HM.et al.Moderate dose steroids prevent severe flares of serologically active,clinically stable SLE patient[J]. Arthritis Rheum. 2003,48,S260.
5.张墨，陈骊珠. 系统性红斑狼疮治疗进展. 青岛医学卫生, 2008，40（3）：211-213
6.吴南海，系统性红斑狼疮的造血干细胞移植治疗. 临床儿科杂志. 2008，26（4）：362-364
7.Mageed RA. Prudhomme GJ.Immunopathology and the genetherapy of lupus[J]. Gene Ther.2003,10(10):861-865
8.杨坚，王惠明，靶向DNA特异性B细胞在系统性红斑狼疮中的治疗研究进展.现代医学卫生, 2008,24(12):1835-1836
9.姜鸿南，祁岩超，王远东.CIK细胞的特点及研究进展.世界肿瘤杂志，2005，4（3）：240-242
10.祁岩超，王得周，杨波等，脐血CD3AK细胞的制备，生物活性测定及临床应用初探.中国肿瘤临床，2004，31（17）：381-383
脐血CIK细胞治疗严重系统性红斑狼疮二例
祁岩超
广州医学院附属肿瘤医院 广州市横岗路78号 510095
E-mail: ycqi@tom.com Tel: 13802790669
系统性红斑狼疮(SLE)是一种异质性疾病,是机体免疫系统功能失调后,对自身抗原产生免疫应答,造成自身组织器官病理损伤和功能障碍的一组疾病.目前对SLE的治疗主要是采用非特异免疫抑制,如激素,CTX等.虽在一定程度上可减轻症状,但终不能彻底解决问题.临床上对于那些“难治性SLE”更觉非常棘手.我们采用脐血CIK细胞治疗两例严重的难治性SLE,取得显著疗效,现报告如下:
一、脐血CIK细胞制备和输注(略)
二、典型病例
例1. 关XX， 女、现年48岁，患严重红斑狼疮，狼疮脑、肾炎10年，伴下肢水肿，皮肤逐渐变黑，溃疡，有异味，坏疽及剧痛2年余，加重3个月。多方治疗效果不佳，且病情逐渐加重。已经无治疗希望。权威医院拒绝受治,经治疗医生动员截肢保命,病情已到绝路。在极度的痛苦和绝望中,要求试用生物治疗。自从2004年6月3日用生物疗法后，病情神奇好转,双下肢水肿全部消退，11处坏疽，溃疡的疮面全部愈合，黑色痂皮已经脱落，呈现出了新鲜健康的皮肤组织。现在患者已能自由活动,进入正常生活。
例2.蔡XX,男, 现年18岁, 患系统性红斑狼疮, 狼疮脑、狼疮肾炎伴双侧胸腔小量积液,全身浮肿, 咳嗽、咳痰、呕吐等5年. 经多方治疗, 效果不佳。而且贫血严重, 靠每周输血一次维持生命, 有的经治医生亦失去信心, 建议家属放弃治疗。绝望之中, 抱着一线希望,试用生物治疗. 2005年10月8日开始加用生物治疗。 一疗程后, 病情明显好转, 咳嗽、咳痰、呕吐症状明显好转。浮肿消失, 双侧胸腔积液消失.二个疗程后实验室检查, 除蛋白尿生物治疗前后无明显改变外, 其它指标基本恢复正常, 现已恢复了休学三年的正常学习。
三、讨论
SLE是一种典型的自身免疫性疾病(AID),有学者提出AID是一种造血干细胞异常导致的一组异常多克隆T、B淋巴细胞病.因此通过造血干细胞移植,破坏原来的异常免疫系统,恢复健康的免疫机制,有可能从根本上治愈AID,并且临床上也取得了一定效果。
CIK细胞是肿瘤细胞免疫治疗中常用的方法之一。 CIK细胞是CD3和CD56双阳性细胞,又叫NK样T淋巴细胞.对肿瘤细胞的识别和杀伤能力较强,目前被广泛用于肿瘤患者的过继免疫治疗。脐血CIK细胞治疗系统性红斑狼疮,国内外尚未见报道。脐血CIK细胞治疗SLE取得了显著疗效,可望为“难治性SLE”提供一个新的治疗方法。 脐血CIK细胞治疗SLE的基理,有待进一步研究。
(0811 天津市 第四届全国生物治疗学术会议 投稿)
脐血CIK细胞治疗严重性系统性红斑狼疮二例（是总共治疗两例，还是治疗好几例，只有两例效果好？）
祁岩超
广州医学院附属肿瘤医院 广州市横岗路78号 510095
E-mail: ycqi@tom.com Tel: 13802790669
【摘要】:目的:探讨严重型红斑狼疮的新的治疗方法.方法:从健康产妇足月分娩的脐带血中提取单个核细胞制备CIK细胞.再用CIK细胞输注治疗严重型红斑狼疮的（加上）病人.结果: 通过CIK细胞输注，使（加上）现有方法治疗无效的二位严重型红斑狼疮患者的症状完全恢复,实验室指标明显好转,分别进入了（已能进行）正常的生活和学习.结论:CIK细胞过继免疫疗法可望成为治疗严重型红斑狼疮的新的辅助疗法.
【关键词】脐带血; CIK; 治疗; 红斑狼疮;
系统性红斑狼疮(System Lupus Erythemotosus,SLE)是一种异质性疾病,是机体免疫系统功能失调后,对自身抗原产生免疫应答,造成自身组织器官病理损伤和功能障碍的一组疾病(10.目前对SLE的治疗主要是采用非特（加上）异免疫抑制剂（加上）,如激素,环磷酰胺(CTX)等.虽在一定程度上可减轻症状,但终不能彻底解决问题(2).临床上对于那些“难治性SLE”更觉非常棘手.我们采用脐血CIK(Cytokine Induced Kill Cell)细胞治疗两例严重的难治性SLE,取得显著疗效,现报告如下:
3.材料和方法
1.1.主要仪器和材料
CO2恒温培养箱，日本Hikama公司出品；倒置显微镜，日本Olympus公司出品；Wellscan MK3型酶标仪，芬兰Labsystems公司出品；超净工作台等均为国产。K562细胞株，本室培养；基因工程IL-2，北京中化合通公司；CD3单克隆抗体（CD3Ab）加拿大YES生物技术公司，RPMI-1640培养基Gibco公司；Ficoll-hypaque D=1.077上海试剂二厂；人AB血清，广州中心血站提供。
1.2.脐血CIK细胞制备和输注
脐血采集 脐血取自正常足月妊娠健康产妇，于胎儿娩出断脐消毒后，选择较粗脐静脉穿刺，封闭式采取血液入无菌肝素抗凝血袋中。
CIK细胞制备 用Ficoll-Hypague淋巴细胞分离液（2000转/分，20min），分离出脐血单个核细胞，再用RPMI-1640培养液离心洗涤2次，用含有5%人AB血清的RPMI-1640培养液调至细胞浓度为5×106/ml，培养液含IL-2 1000U/ml和CD3Ab 5μg/ml, INF-γ1000μ/ml, IL-1 100μ/ml。370C，5%CO2条件下培养，分别于第7-14天收集(3).
CIK细胞输注 每位患者每次静脉输注CIK细胞1.6∽6.5×108,每天或隔天一次,6∽10（是6-10吧？）次一疗程，每位患者输入CIK细胞总数2×109∽4.6×109（这段可省略）
2.结果
例1. 关XX， 女、现年48岁，患严重红斑狼疮，狼疮脑、肾炎10年，伴下肢水肿，皮肤逐渐变黑，溃疡，有异味，坏疽及剧痛2年余，加重3个月。多方治疗效果不佳，且病情逐渐加重。已经无治疗希望。权威医院拒绝受治,经治疗医生动员截肢保命,病情已到绝路。在极度的痛苦和绝望中,要求试用生物治疗。自从2004年6月3日用生物疗法后，病情神奇好转,双下肢水肿全部消 ，11处坏疽，溃疡的疮面基本愈合，黑色痂皮已经脱落，呈现出了新鲜健康的皮肤组织。现在患者已能自由活动,进入正常生活。（应详细交代CIK细胞输注治疗的时间，每次用量，用几次，每次输注的间隔时间，几个疗程，治疗过程中的详细好转经过，治疗前后的患者症状，体征及化验室指标对比变化。进行CIK细胞输注治疗时，还同时进行了什么治疗，随访多长时间，近远期疗效如何？）
例2.蔡XX,男, 现年18岁, 患系统性红斑狼疮, 狼疮脑、狼疮肾炎伴双侧胸腔小量积液,全身浮肿, 咳嗽、咳痰、呕吐等5年. 经多方治疗, 效果不佳。而且贫血严重, 靠每周输血一次维持生命, 有的经治医生亦失去信心, 建议家属放弃治疗。绝望之中, 抱着一线希望,试用生物治疗. 2005年10月8日开始加用生物治疗。 一疗程后, 病情明显好转, 咳嗽、咳痰、呕吐症状明显好转。浮肿消失, 双侧胸腔积液消失.二个疗程后实验室检查, 除蛋白尿生物治疗前后无明显改变外, 其它指标基本恢复正常, 现已恢复了休学三年的正常学习（应详细交代CIK细胞输注治疗的时间，每次用量，用几次，几个疗程，治疗过程中的详细好转经过，治疗前后的患者症状，体征对比变化。进行CIK细胞输注治疗时，还同时进行了什么治疗，随访多长时间，近远期疗效如何？）。
注意：不要提病人的姓名和住院号。
蔡XX生物治疗前后实验室检查结果
|
生物治疗前 |
生物治疗后 |
参考值 |
血红蛋白 |
75(050926) |
115(060217) |
120-160 g/L |
血清尿素氮 |
24.5(050920) |
4.9(060217) |
1.8-7.1mmol/L |
血清IgA |
1.03(050930) |
1.10(060217) |
0.69-3.82 |
血清IgG |
5.160 |
6.200 |
8-16 |
血清IgM |
0.441 |
0.646 |
0.62-2.77 |
补体3 |
0.716 |
1.250 |
0.85-1.93 |
补体4 |
0.249 |
0.276 |
0.12-0.36 |
尿蛋白 |
3.0(050920) |
3.0(060114) |
0g/L |
3.讨论
SLE是一种典型的自身免疫性疾病(Autoimmune Disease,AID), 目前临床上主要使用糖皮激素及其它广谱免疫抑制剂进行治疗。但其不良反应明显并且效果有限（4-5）。最近有人提出AID是造血干细胞异常导致的一组异常多克隆T、B淋巴细胞病，因此通过造血干细胞移植，破坏原来的异常免疫系统，恢复健康的免疫机制，有可能从根本上治愈AID，并且在临床上也取得了一定的效果。但是由于某些严重SLE因多伴有脏器损伤，不能耐受强烈的清髓治疗，又因移植物抗宿主反应（GVHD），和移植相关死亡率较高（10%）等。难于广泛推广（6）。当前以DNA特异性B细胞为靶标的干预治疗即“DNA疫苗”策略已成为治疗SLE的热点（7）。然而研究发现自身反应性B细胞在抗原提呈及共刺激分子表达方面的缺陷，因此，它能够逃避DNA疫苗诱导的CTL的“识别或杀伤”，同时DNA疫苗的安全性和应用于人体后免疫效果明显减弱等问题也尚未完全解决（8）。
CIK细胞是肿瘤细胞免疫治疗中常用的方法之一(9)。 CIK细胞是CD3和CD56双阳性细胞,又叫NK样T淋巴细胞.对肿瘤细胞的识别和杀伤能力较强,目前被广泛用于肿瘤患者的过继免疫治疗。我们运用脐血CD3AK细胞和脐血CIK细胞治疗肿瘤近10年,除了有5%患者有轻,中度的发热外,未见任何不良反应.实践证明使用安全(10).
我们用脐血CIK细胞治疗系统性红斑狼疮,国内外尚未见报道。脐血CIK细胞治疗SLE取得了显著疗效,可望为“难治性SLE”提供一个新的治疗方法。 脐血CIK细胞治疗SLE的机理,有待进一步研究（能否对其作用机理引用一些文献，进行一下推测？）。
参考文献
11.马丽，系统性红斑狼疮的个体化治疗（VCD），中华医药临床杂志（电子版），2008，2（6）：56
12.吴南海，系统性红斑狼疮的造血干细胞移植治疗. 临床儿科杂志.2008，26（4）：362-364
13.祁岩超，姜鸿南，王远东,等.脐血来源CIK细胞的体外扩增培养.世界肿瘤杂志，2006，5（1）：12-14
14.Tseng C. Bugon J, Belmont.HM.et al.Moderate dose steroids prevent severe flares of serologically active,clinically stable SLE patient[J]. Arthritis Rheum. 2003,48,S260.
15.张墨，陈骊珠. 系统性红斑狼疮治疗进展. 青岛医学卫生, 2008，40（3）：211-213
16.吴南海，系统性红斑狼疮的造血干细胞移植治疗. 临床儿科杂志. 2008，26（4）：362-364
17.Mageed RA. Prudhomme GJ.Immunopathology and the genetherapy of lupus[J]. Gene Ther.2003,10(10):861-865
18.杨坚，王惠明，靶向DNA特异性B细胞在系统性红斑狼疮中的治疗研究进展.现代医学卫生, 2008,24(12):1835-1836
19.姜鸿南，祁岩超，王远东.CIK细胞的特点及研究进展.世界肿瘤杂志，2005，4（3）：240-242
20.祁岩超，王得周，杨波等，脐血CD3AK细胞的制备，生物活性测定及临床应用初探.中国肿瘤临床，2004，31（17）：381-383
关于参考文献：
1.不要引用太多，3-5条够用。
2.应按在文章中出现的先后顺序排列。
3.参考文献7，11，12在文章中没出现。
脐血CIK细胞治疗严重性系统性红斑狼疮
祁岩超
广州医学院附属肿瘤医院 广州市横岗路78号 510095
E-mail: ycqi@tom.com Tel: 13802790669
【摘要】:目的:探讨严重型红斑狼疮的新的治疗方法.方法:从健康产妇足月分娩的脐带血中提取单个核细胞制备CIK细胞.再用CIK细胞输注治疗严重型红斑狼疮的病人.结果: 通过CIK细胞输注，使现有方法治疗无效的二位严重型红斑狼疮患者的症状完全恢复,实验室指标明显好转,已能进行正常的生活和学习.结论:CIK细胞过继免疫疗法可望成为治疗严重型红斑狼疮的新的辅助疗法.
【关键词】脐带血; CIK; 治疗; 红斑狼疮;
Two cases with severe SLE treated by CIK cells from cord blood
Qi Yanchao
Guangzhou Medical College Affiliated Tumor Hospital, Guangzhou 510095
Abstract: Objective: To investigate a new therapy for patients with severe lupus erythematosus. Methods: Cytokine-induced killer cells (CIK) were prepared from mononuclear cells isolated from the cord blood of healthy puerperants and were then infused to the patients. Results: Two patients with severe sestem lupus erythematosus treated with the existing therapeutic methods showed no effective response, but their symptoms fully recovered by CIK cells infusion and the laboratory indicators were obviously improved. Both of them had a normal life and learning resperctively. Conclusions: Adoptive CIK cells immunotherapy was expected to become a new adjuvant therapy for the patients with severe lupus erythematosus.
【Key Words】Cord Blood; CIK; Treat; SLE
系统性红斑狼疮(System Lupus Erythemotosus,SLE)是一种异质性疾病,是机体免疫系统功能失调后,对自身抗原产生免疫应答,造成自身组织器官病理损伤和功能障碍的一组疾病(1).目前对SLE的治疗主要是采用非特异免疫抑制剂,如激素,环磷酰胺(CTX)等.虽在一定程度上可减轻症状,但终不能彻底解决问题(2).临床上对于那些“难治性SLE”更觉非常棘手.我们采用脐血CIK(Cytokine Induced Kill Cell)细胞治疗两例严重的难治性SLE二例,全部取得显著疗效,现报告如下:
4.材料和方法
1.1.主要仪器和材料
CO2恒温培养箱，日本Hikama公司出品；倒置显微镜，日本Olympus公司出品；Wellscan MK3型酶标仪，芬兰Labsystems公司出品；超净工作台等均为国产。K562细胞株，本室培养；基因工程IL-2，北京中化合通公司；CD3单克隆抗体（CD3Ab）加拿大YES生物技术公司，RPMI-1640培养基Gibco公司；Ficoll-hypaque D=1.077上海试剂二厂；人AB血清，广州中心血站提供。
1.2.脐血CIK细胞制备和输注
脐血采集 脐血取自正常足月妊娠健康产妇，于胎儿娩出断脐消毒后，选择较粗脐静脉穿刺，封闭式采取血液入无菌肝素抗凝血袋中。
CIK细胞制备 用Ficoll-Hypague淋巴细胞分离液（2000转/分，20min），分离出脐血单个核细胞，再用RPMI-1640培养液离心洗涤2次，用含有5%人AB血清的RPMI-1640培养液调至细胞浓度为5×106/ml，培养液含IL-2 1000U/ml和CD3Ab 5μg/ml, INF-γ1000μ/ml, IL-1 100μ/ml。370C，5%CO2条件下培养，分别于第7-14天收集
2.结果
例1. 关XX， 女、现年48岁，患严重红斑狼疮，狼疮脑、肾炎10年，伴下肢水肿，皮肤逐渐变黑，溃疡，有异味，坏疽及剧痛2年余，加重3个月。多方治疗效果不佳，且病情逐渐加重。已经无治疗希望。权威医院拒绝受治,经治疗医生动员截肢保命,病情已到绝路。在极度的痛苦和绝望中,要求试用生物治疗。自从2004年6月3日用生物疗法，具体方法是: 3.6—6.5X108 CIK细胞加入100-150ml的含1%人白蛋白的生理盐水中,静脉输注,每天一次,10次一个疗程。CIK细胞治疗过程中,停用其它常规治疗药物。 第一天CIK治疗后,其疼痛明显好转,食欲增加,睡眠良好.10天CIK治疗后,病情神奇好转,双下肢水肿几乎全部消 ，治疗六个月后,11处坏疽，溃疡的疮面10个疮面基本愈合，黑色痂皮已经脱落，呈现出了新鲜健康的皮肤组织。半年后进行第二疗程CIK治疗,治疗后四个月,患者的坏疽，溃疡的疮面全部愈合,精神和体质明显好转,现在患者已能自由活动,进入正常生活。随防近4年,病请稳定,没有发现复发症状。
例2.蔡XX,男, 现年18岁, 患系统性红斑狼疮, 狼疮脑、狼疮肾炎伴双侧胸腔小量积液,全身浮肿, 咳嗽、咳痰、呕吐等5年。 经多方治疗, 效果不佳。而且贫血严重, 靠每周输血一次维持生命, 有的经治医生亦失去信心, 建议家属放弃治疗。绝望之中, 抱着一线希望,试用生物治疗。 2005年10月8日开始加用生物治疗。具体方法是: 3.0—5.5 X 108 CIK细胞加入100-150ml的含1%人白蛋白的生理盐水中,静脉输注,每天一次,6次一个疗程。CIK细胞治疗过程中,其它常规治疗药物继续应用。 第一个疗程后, 病情明显好转, 咳嗽、咳痰、呕吐症状明显好转。三个月后浮肿消失, 双侧胸腔积液消失,不再需要输血治疗。三个月后进行第二个疗程CIK细胞治疗,并逐渐减少激素的用量,一月后停用激素。实验室检查, 除蛋白尿生物治疗前后无明显改变外, 其它指标基本恢复正常, 现已恢复了休学三年的正常学习。随访近三年, 没有发现异常症状。
蔡XX生物治疗前后实验室检查结果
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生物治疗前 |
生物治疗后 |
参考值 |
血红蛋白 |
75.0(050926) |
115(060217) |
120-160 g/L |
血清尿素氮 |
24.5(050920) |
4.9(060217) |
1.8-7.1 mmol/L |
血清IgA |
1.03(050930) |
1.10(060217) |
0.69-3.82 |
血清IgG |
5.160 |
6.200 |
8-16 |
血清IgM |
0.441 |
0.646 |
0.62-2.77 |
补体3 |
0.716 |
1.250 |
0.85-1.93 |
补体4 |
0.249 |
0.276 |
0.12-0.36 |
尿蛋白 |
3.0(050920) |
3.0(060114) |
0g/L |
3.讨论
SLE是一种典型的自身免疫性疾病(Autoimmune Disease,AID), 目前临床上主要使用糖皮激素及其它广谱免疫抑制剂进行治疗。但其不良反应明显并且效果有限（3）。最近有人提出AID是造血干细胞异常导致的一组异常多克隆T、B淋巴细胞病，因此通过造血干细胞移植，破坏原来的异常免疫系统，恢复健康的免疫机制，有可能从根本上治愈AID，并且在临床上也取得了一定的效果。但是由于某些严重SLE因多伴有脏器损伤，不能耐受强烈的清髓治疗，又因移植物抗宿主反应（GVHD），和移植相关死亡率较高（10%）等。难于广泛推广（4）。当前以DNA特异性B细胞为靶标的干预治疗即“DNA疫苗”策略已成为治疗SLE的热点(5）。然而研究发现自身反应性B细胞在抗原提呈及共刺激分子表达方面的缺陷，因此，它能够逃避DNA疫苗诱导的CTL的“识别或杀伤”，同时DNA疫苗的安全性和应用于人体后免疫效果明显减弱等问题也尚未完全解决（6）。
CIK细胞是肿瘤细胞免疫治疗中常用的方法之一, 对肿瘤细胞的识别和杀伤能力较强,目前被广泛用于肿瘤患者的过继免疫治疗。我们运用脐血CD3AK细胞和脐血CIK细胞治疗肿瘤近10年,除了有5%患者有轻,中度的发热外,未见任何不良反应.实践证明使用安全。
CIK细胞是CD3和CD56双阳性细胞,又叫NK样T淋巴细胞。也就是说,CIK细胞既有NK细胞的非MHC限制性杀瘤的特点,还有T淋巴的抗瘤活性。而T淋巴的抗瘤活性,除了T细胞本身的特异杀伤功能外,还能分泌IL-2,IL-6,IFN 和NTF等细胞因子(7)。这些细胞因子对调节机体免疫有一定作用，脐血CIK细胞治疗SLE的机理是否通过这些细胞因子来完成,有待进一步研究。
我们用脐血CIK细胞治疗系统性红斑狼疮,国内外尚未见报道。脐血CIK细胞治疗SLE取得了显著疗效,可望为“难治性SLE”提供一个新的治疗方法。
参考文献
21.马丽，系统性红斑狼疮的个体化治疗（VCD），中华医药临床杂志（电子版），2008，2（6）：56
22.吴南海，系统性红斑狼疮的造血干细胞移植治疗. 临床儿科杂志.2008，26（4）：362-364
23.张墨，陈骊珠. 系统性红斑狼疮治疗进展. 青岛医学卫生, 2008，40（3）：211-213
24.吴南海，系统性红斑狼疮的造血干细胞移植治疗. 临床儿科杂志. 2008，26（4）：362-364
25.Mageed RA. Prudhomme GJ.Immunopathology and the genetherapy of lupus[J]. Gene Ther.2003,10(10):861-865
26.杨坚，王惠明，靶向DNA特异性B细胞在系统性红斑狼疮中的治疗研究进展.现代医学卫生, 2008,24(12):1835-1836
27.张志凯，祁岩超.CIK细胞生物学特性及抗肿瘤作用的研究进展.世界肿瘤杂志，2008，7（1）：52-56
